一、生物素简介
生物素（biotin，B）分子量为244．31D。生物素分子有两个环状结构，其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；Ⅱ环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。
二、生物素衍生物简介
1、常见的标记方法
| 标记方法 | 举例 | 说明 |
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标记蛋白质氨基 |
生物素羟基琥珀酰亚胺酯（BNHS） |
适用于标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质 |
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长臂活化生物素（BCNHS） |
添加两个6-氨基己糖，形成连接臂 |
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标记蛋白质醛基 |
生物素酰肼（BHZ） |
标记偏酸性糖蛋白 |
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肼化生物胞素（BCHZ） |
除醛基外，还可标记氨基 |
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标记蛋白质巯基 |
马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB） |
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标记核酸 |
光生物素 |
侧链芳香基叠氮物，光照后，变为芳香基硝基苯 |
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生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） |
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BNHS和BHZ直接标记核酸 |
对碱基配对有影响 |
2、常见的生物素衍生物结构及其性质
三、生物素标记产物的检测
1、检测原理：
亲和素（avidin，AV）也叫做抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用，尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强，亲和素常数（K）为10^15 l/mol，比抗原与抗体间的亲和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1万倍，二者的结合特异性高和稳定性好。因此，可以用标记HRP或荧光素的亲和素或链霉亲和素去检测生物素的标记产物。
2、检测方法举例：
1）荧光标记的亲和素进行荧光检测
2）标记亲和素-生物素ELISA检测法（LBA法）
3）桥接亲和素-生物素ELISA检测法（BAB法）
4）亲和素-生物素-过氧化物酶复合物ELISA检测法（ABC法）
5）标记链霉亲和素-生物素ELISA检测法（LSAB法）
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